Определение органических соединений в растительном экстракте

Материалы и способы

Объектом исследования являлось собранное в ЮКО, Ордабасинском районерастения – Зайцегуб опьяняющий (LagochilusinebriansBunge) Видовая принадлежность была определена на базе результатов камеральных обработок собранного материала и таксономического анализа видов.

Получение фитоэкстракта

Фитоэкстракт дайындау үшін 10г ұсақталған өсімдіктің жерүсті бөлігіне 100 мл этонол (96˚C) құйылып, 3 күн қараңғы жерге Определение органических соединений в растительном экстракте қойылды. Кейін стерильді фильтр қағазымен сүзіліп алынып, 70˚C су моншасында 3 күн тиндализацияланды. Фитоэкстракттың тазалығы тексерілді.

Исследование антимикробной активности экстракта

Исследование антимикробной активности экстракта Зайцегубаопьяняющего(LagochilusinebriansBunge) проводилось способом диффузии в агар. В качестве тест-культур были взяты музейные и нами выделенные штаммы грамположительных микробов видов Staphylococcus Определение органических соединений в растительном экстракте aureus, Bacillus cereus; грамотрицательных - Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa. В качестве препаратов сопоставления использовали аптечнуюромашку (цветочки).

Тест культуры выращивали на водянистой среде при температуре от 30 до 37˚С в течение 18-20 часов. Культуры разводили 1:1000 в стерильной воде, вносили по 1 мл в чашечки с надлежащими элективными питательными средамидля изучаемых тест-штаммов и засевали по способу Определение органических соединений в растительном экстракте «сплошного газона».

После на поверхносли агара сформировывали лунки размером 6 мм, в которые вносили исследуемые эталоны экстракта, препараты сопоставления и контроль. Контролем служило этиловый спирт. Посевы инкубировали при 37˚С, учет результатов проводили через 24 часа.

Антимикробную активность образцов определяли по поперечнику зон задержки роста тест-штаммов (мм). Поперечник зон задержки Определение органических соединений в растительном экстракте роста меньше 10 мм и сплошной рост в чашечке оценивали как отсутсвие бактерицидной активности, 10-15 мм – слабенькая активность, 15-20 мм – равномерно выраженная активность выше 20 мм – выраженная активность. Каждый эталон испытывался в 3-х параллельных опытах.

Исследование ранозаживляющей активности экстракта

Резаная рана

Для исследования воздействия экстракта Зайцегубаопьяняющего(LagochilusinebriansBunge) на заживление гнойных ран у крыс в опытах invivoбыла применена Определение органических соединений в растительном экстракте раневая поверхность, экспериментально приобретенная в опытах с внедрением 15 самцов беспородных белоснежных крыс (вес 200-230г). Верхняя чать спины крыс обрабатывались 70˚C этанолом. Потом, на очищенном кожном покрове с левой и правой сторон вырезалась рана длиной – 2,5±0,5 см и глубиной – 4±0,1 мм при помощи мед скальпеля.

В течение опыта все животные содержались Определение органических соединений в растительном экстракте в схожих критериях виварного режима. Экспериментальные крысы были разбиты на три группы (1 бывалые и 2 контрольная, по 5 животных в каждой группе ). В момент нанесения раны животные находились под общим эфирным наркозом.

Раны крыс с целью формирования искусственной гнойной среды заражали бактериальной суспензией (St. aureus) и после 48 часов рану обработали Определение органических соединений в растительном экстракте экстрактом зайцегуба опьяняющего. Раны животных первой группы обработали экстрактом зайцегуба опьяняющего, раны 2-ой группы оброботали экстрактом ромашкой для сопоставления (контроль 1), 3-я группа ( контроль 2) нелеченные животные.

Для исцеления гнойных ран у крыс этой группы применяли последующую стратегию: гнойные раны животных обработали экстрактами растении, функцию по отбиранию проб производили 1 раз в Определение органических соединений в растительном экстракте 2 денька. Забор материала данной серии на исследования производили на 2-ые, четвертые, восьмые, двенадцатые и шестнадцатые деньки с момента начала исцеления.

Тепловой ожог

Био опыты проводили на беспородных белоснежных крысах в согласовании с «Правилами работ с внедрением экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 № 755) Животных содержали в критериях Определение органических соединений в растительном экстракте вивария на стандартном пищевом рационе при свободном доступе к воде и естественном освещении. Экспериментальный тепловой ожог кожи производили в подобных критериях прижиганием железным шпателем, за ранее нагретым в верхней зоне пламени спиртовки, температура которой, согласно техническим характеристикам, обозначенным изготовителем, составляет 900°С (Технобиоэн, Москва), в течение 40 с. Однообразное положение шпателя в Определение органических соединений в растительном экстракте пламени и время прогрева перед моделированием каждого ожога обеспечивали схожую глубину повреждения тканей. Потом в 4 точках обожженного участка, также резаной раны внутрикожно вводили 24-часовую культуру Staphylococcusaureusв дозе 1010 КОЕ/мл в объеме 0,1 мл. Контрольной группе животных раны обрабатывали 1 раз в 2 день, в течение 20 дней 1 мл физиологического раствора, закрывали стерильной салфеткой Определение органических соединений в растительном экстракте и фиксировали лейкопластырем. Опытным животным аналогичным методом рану обработали экстрактом растении. Динамику заживления ран учитывали зрительно, начиная со 2-го денька, на основании размера и глубины, состояния краев, стен и дна раны, наличия и вида некротических тканей, площади неэпителизированной поверхности раны в мм2.

Определение органических соединений в растительном экстракте

Пробу анализировали при Определение органических соединений в растительном экстракте помощи газового хроматографа (ГХ) AgilentTechnology 6890 с масс-спектрометрическим (MC) сенсором 5973 при таких параметрах: колонка кварцевая, капиллярная DB-35MS, длиной 30м, внутренний поперечник — 0.25мм шириной пленки 0.25 мкм, температура термостата программировалась от 50°С до 300°С со скоростью 10°С/мин, температура инжектора - 250°С. Режим детектирования – мониторинг ионов в спектре m/z 34 до Определение органических соединений в растительном экстракте 550. Идентификация веществ проводилась на базе сопоставления приобретенных мас-спектров с данными библиотеки NIST05-WILEY.

Статистическую обработку проводили способами параметрической статистики с вычислением средней арифметической и стандартной ошибки.

Результаты исследования антимикробной активности образцов приведены в таблице 1

Таблица 1

Антимикробная активность экстракта L.inebrians

Исследуемый экстракт Ингибирование роста, мм
S. aureus Определение органических соединений в растительном экстракте B. cereus E. coli P.aeruginosa
Lagochilusinebrians (цветочки и листья) 12±0,53 7±0,12 10±0,75 7±0,48
Matricaria recutita L.(цветочки) 4,1±0,16 1,5±0,14 3±0,11 1,7±0,23

Водянистый экстракт зайцегуба опьяняющего (L.inebrians) обладает выраженной активностью в отношений всех грамположительных и грамотрицательных видов бактерии по сопоставлению с экстрактами цветов ромашки (Matricaria recutita L.)

Динамика процесса заживления кожной раны контролировалась измерением объема кожи, оценивали общее Определение органических соединений в растительном экстракте состояние животных, сроки возникновения грануляционной ткани, подсчет количества микробов из кожного покрова. Состояние раневой поверхности раз в день фиксировали на цифровую камеру и определяли ее площадь. Аспектом для окончания исцеления во всех случаях служила эпителизация раневой поверхности и покрытие ее шерстью. Приобретенные результаты исследования сравнили по группам.

Микробиологическую картину Определение органических соединений в растительном экстракте раневого процесса оценивали на 4 день от начала нанесения раны на 8, 12, 16. Проводили посев с раны на селективные среды. Подсчет количества выросших микробов проводили по таблице в колонеобразующих единицах на 1 мл раневого отделяемого (КОЕ/мл).

Таблица 2

Группа животных Количественное содержание микрофлоры в гнойной ране, КОЕ
Экстракт L. inebrians 5,7×104 6х Определение органических соединений в растительном экстракте103 0.4х102
Экстракт Matricaria recutita L. (контроль 1) 1,2×105 3×104 3.2×103 0,8×101
Не леченные животные (контроль 2) 1×104 1×105 2,4×104 0,4×103

На восьмые день от начала исцеления экстрактом, выделенным из листьеви растений зайцегуба опьяняющего, высев штамма S. aureus с раневой поверхности, наблюдается меньше по сопоставлению с контролями. На шестнадцатые день не наблюдается высев микробов, что подтверждает антимикробные характеристики данного экстракта.

В Определение органических соединений в растительном экстракте протяжении всего периода исцеления проводили каждодневный застыл раны до окончания опыта. На 4-ый денек после инфецирования ран S. aureus, размеры ран возросли и составили более 120% от начальных размеров. После санации раневой поверхности размер ран стал уменьшаться во всех исследуемых группах. Но приобретенные нами данные свидетельствуют о значимом уменьшении площади раны Определение органических соединений в растительном экстракте конкретно в группе, пролеченный экстрактом, выделенным из листьев ицветков зайцегуба опьяняющегона 10 денек. И уже на 14 денек наблюдалось полное закрытие раневого недостатка, в области раны сформировался рубец, а в контрольной группе к 12 суткам только началосьснижение площади раны. Приобретенные результаты представлены в таблице 3.

Таблица 3

Динамика конфигурации площади ран в исследуемых группах Определение органических соединений в растительном экстракте от начала нанесения и инфецирования раны.

Группа животных
Экстракт Сatalpaspeciosa(листья)
Экстракт Matricaria recutita L. (контроль 1)
не леченные животные (контроль 2)

Таким макаром экстракт, ранозаживляющее действие предлагаемой экстракта превосходит действие экстракта сопоставления Matricaria recutita L. По результатом данного опыта установлено, что выделенный из листьев и растений L.inebrians экстракт обладает лучшим Определение органических соединений в растительном экстракте ранозаживляющим действием.

Дальше мы изучили терапевтическую эффективность фосфомицина при эксперименталь- ной инфицированной тепловой ране. У всех животных через 24 ч после теплового воз- деяния кожа в области ожога была уплотнена, отечна, в центре ожога отмечалось нарушение целостности кожных покровов, сукровичное отделяемое; края ожоговой раны были верно отграничены Определение органических соединений в растительном экстракте от окружающей здоровой кожи. Начиная с 3 суток опыта в центре ожога отмечалось скопление некротических масс. Динамика конфигурации площади раны под действием разных экстрактов представлена на рисунке.

Установлено, что полная эпителизация ожоговой раны у животных под действием экстракта L.inebriansпроисходила на 20 день, при терапии экстрактом Matricaria recutita L. на 24 день, в контроле Определение органических соединений в растительном экстракте на 28 день. Как следует, обработка экспериаентальной инфицированной тепловой раны с экстрактом L.inebriansприводит к ускорению репарации таканевого недостатка по сопоставлению с контрольными значениями.

Результаты определения веществ спиртовых экстрактов листьев абрикоса приведены в таблице.

Время удерживания, мин Соединения Возможность идентификации, % Процентное содержание, %
8.652 Оксибензол 0,06
10.074 Бензиловый спирт 0,08
14.894 Eugenol 0,17
31.225 O-метил-δ-токоферола 0,10
32.282 Витамин Е Определение органических соединений в растительном экстракте 2,85
35.380 стигмастерин 0,90
36.635 γ-ситостерол 11,68

Всего в экстракте из листьев и растений Lagochilusinebriansбыло идентифицировано 73 органических соединении. Из их выявлено что обладает антимикробной активностью, В значимых количествах в экстрактах из листьев и растений содержался эвгенол [], оксибензол, бензиловый спирт владеющий антимикробной активностью,O-метил-δ-токоферола, витамин Е владеющий антиоксидантной и антивосполительной активностью и γ-ситостерол владеющий антиатерогенной активностью.

1. У Определение органических соединений в растительном экстракте.Н. Зайнутдинов, Д.Н. Далимов, А.Д. Матчанов, А.Х. Исламов, Р.Т. Тлегенов**, Н.Х. Бозорова, Ф.А. СобироваСРАВНИТЕЛЬНОЕИЗУЧЕНИЕДИКОРАСТУЩЕЙИКУЛЬТУРНОЙФОРМLAGOCHILUSINEBRIANSХИМИЯРАСТИТЕЛЬНОГОСЫРЬЯ. 2011. №2. С. 189–190.


opredelenie-ogneupornosti-glin-i-keramicheskih-mass.html
opredelenie-opornih-reakcij-izgibayushih-i-krutyashih-momentov.html
opredelenie-optimalnih-rezhimov-raboti-datchika.html